人CD3/CD28 T細胞激活磁珠
￥1998.00
人CD3/CD28 T細胞激活磁珠可以簡單快捷的活化及擴增 T 細胞，無需飼養層細胞（抗原遞呈細胞）或抗原。磁珠為直徑5 μm 的惰性超順磁珠，大小與抗原呈遞細胞相似，同時共價偶聯抗 CD3 和抗 CD28 抗體。細胞培養過程中可使用重組人IL-2 刺激 T 細胞群擴增。活化或擴增后，磁珠可以通過磁力架輕松去除。
- 產品貨號:70910-1000
- 產品單位:-
- 產品說明:盒
人CD3/CD28 T細胞激活磁珠可以簡單快捷的活化及擴增 T 細胞，無需飼養層細胞（抗原遞呈細胞）或抗原。磁珠為直徑5 μm 的惰性超順磁珠，大小與抗原呈遞細胞相似，同時共價偶聯抗 CD3 和抗 CD28 抗體。細胞培養過程中可使用重組人IL-2 刺激 T 細胞群擴增。活化或擴增后，磁珠可以通過磁力架輕松去除。
產品信息
濃度：1 x 108 beads/mL，產品保存在添加0.1% BSA和0.1% proclin-300的PBS中，pH 7.4。
儲存條件及有效期
2-8°C保存，不可冷凍，有效期見試管標簽。
適用范圍
本試劑盒適用于外周血單核細胞（PBMC）或 T 細胞亞群：包括 CD3+ T 細胞、CD4+ T 細胞或 CD8+ T 細胞。
激活效果
使用人CD3/CD28 T細胞激活磁珠，刺激CD3+ T細胞24到 48小時，細胞用FITC anti-human CD69抗體（克隆號 FN50 ）和PE anti-human CD25抗體（克隆號BC96）標記， 進行流式細胞儀分析。刺激前后CD25+ CD69+ T細胞占總細 胞的比例分別為0.70% 和75.81%。
與美天旎對比如何？
相同點：均能實現高純度、高活性的細胞分選。
不同點：美天旎磁珠因磁珠粒徑小，磁性弱，需要搭配分選柱進行磁性的放大才能實現細胞分離，操作時長約30-60分鐘（分選柱需預沖洗、上樣、洗滌等步驟）。海貍細胞分選試劑盒不需要分選柱，僅需磁力架搭配流式管，最快15分鐘（陰選法）即可分離細胞。
普通的磁力架可以用于細胞分選嗎？
用于細胞分選磁力架的磁場強度要>7000Gs，否則會影響細胞分選效果。
推薦海貍細胞分選磁力架（Cat.No: 60205，60205Ⅱ，60206）。
分選T細胞，樣本處理時要活化嗎（加刀豆蛋白活化）？
我們未對激活處理后的脾臟或淋巴細胞進行T細胞分選驗證。
從理論上講，陰選方式由于不直接結合目標細胞，通常不受激活處理影響；而陽性選擇則可能受到一定影響，尤其是在T細胞激活后某些表面標志物表達發生變化的情況下，可能存在洗脫效率降低的風險。
建議客戶在完成細胞分選后再進行激活處理，可以確保分選效果和細胞狀態的穩定性。
試劑盒里的biotin antibody mix，有沒有封閉Fc受體（FcR）？
沒有封閉Fc受體
可以分選出原代細胞嗎？
可以，海貍的細胞分選試劑盒，從組織或者其他樣本里分選出來的都是原代細胞。
細胞圈門的時候是把所有的細胞都圈入的嗎?
圈所有染上色的細胞，（要看染的部位，細胞碎片、死細胞染不上）。
E1左下角細胞碎片不要圈，P1圈對角線（單個核細胞）
散點圖在流式上比較分散的原因？
可能是磁吸不充分導致的，可以延長磁吸時間或更換磁性更強的磁力架（＞7000Gs）。
做細胞分選用哪款磁珠？
我們自己用的300 nm的SA（Cat. No. 22308C）做細胞分選，包括陽選和陰選。
目前有客戶用的1μm SA（Cat. No. 22307）自己做分選，效果也很好。
細胞分選試劑盒中的磁珠洗滌步驟是否可以用磁力架吸附代替離心？
可以，使用磁性吸附洗滌比離心洗滌效果更好。
細胞分選說明書上要求4℃環境操作，是否可以在冰上操作？
可以。
分選buffer的配方是什么？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預先通過0.22μm濾膜過濾除菌。可以聯系海貍生物購買預配制的分選buffer（Cat. No. 80301）。
自己配制分選buffer時建議使用0.5 M的液體EDTA。原因：固體的EDTA比較難溶解，溶解后也可能會有肉眼看不到的顆粒，所以要過0.22μm的濾膜，但過濾膜可能會損失掉部分EDTA，所以建議用液體的。
為什么海貍的試劑盒需要裂紅后再進行分選？
因為抗體mix中只有少量的紅細胞抗體，防止有紅細胞殘留，所以需要裂紅。
陰選和陽選試劑盒中抗體的區別？
陽選中只有一種抗體，即針對目的細胞的抗體；陰選中是抗體mix，含有多種針對非目標細胞的抗體。
陽選與陰選的區別
陽選法：適用樣本類型多種、復雜，抗體類型單一，需要解離試劑，直接捕獲，細胞沒有磁珠標記，有抗體標記，操作時長最快80min，不需要分離柱。
陰選法：適用樣本類型相對單一，抗體類型為多種抗體的混合物，不需要解離試劑；間接捕獲，不影響細胞性能；細胞沒有磁珠標記和抗體標記，操作時長最快25min，不需要分離柱。
分選buffer的配方是什么？海貍可以提供嗎？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預先通過0.22μm濾膜過濾除菌。可以聯系海貍生物購買預配制的分選buffer。
細胞樣品制備時需要幾次過篩？具體步驟是什么？
推薦進行2次過篩。
第一次過篩：將樣本置于70 μm細胞篩網篩網上進行研磨/沖洗，收集細胞。
第二次過篩：裂紅完成后，使用PBS重懸細胞，將細胞懸液用70 μm細胞篩網過濾。
若只進行1次過篩，殘留的細胞團塊可能會導致細胞/磁珠聚集，降低分選純度。
磁珠使用前需要清洗嗎？不清洗有什么影響？
磁珠使用前需要用分選buffer清洗2次（清洗方法見說明書）；若不清洗，磁珠保存液中的某些組分（如抑菌劑）可能會影響細胞活性。
抗體和細胞孵育時需要注意什么？
將細胞懸液加到離心管底部，再加入Biotin-Antibody Mix，充分吹打混勻（盡量在底部進行吹打，不要濺到管壁上），4°C孵育 10 min（勿將Ep管插進冰里）。
若孵育時間不足，會使抗體與細胞無法充分結合，從而導致非目標細胞殘留，影響分選純度。
磁吸時需要注意什么？
要使用細胞分選專業磁力架，推薦（Cat. No. 60205/60206），靜置5分鐘，磁吸后轉移大部分懸液至新管，注意不要吸到磁珠。磁吸時間過短可能會導致部分磁珠未完全吸附，分選后的細胞中有磁珠殘留，且影響分選純度。
離心條件是否有統一標準？
常規離心條件為500 g，5分鐘（磁珠清洗除外，需10000 g，1分鐘）。離心速度過大（超過500g）影響細胞活性。
激活磁珠，每次換液都將細胞沖散的話會不會影響后續結團擴增？結團的細胞是吹散之后的細胞又聚集在一起了還是細胞增殖的團？
吹散不會影響細胞后續擴增，結團的細胞從原理上來說是細胞增殖的團。
加入激活磁珠后發現大部分的細胞還在皿底，這些細胞是不是結合不上磁珠的，是否還能被激活？
這種情況是正常激活現象，背景中散落的細胞在良好激活情況下，細胞形態會變大，與control會出現形態上的區別。正常的小鼠（未進行造模）分選后CD3 T細胞，按照使用說明刺激24-48h，都可以實現CD25CD69>80%的激活響應。
可以通過流式檢測CD25CD69（24h、48h，需要同時檢測不加磁珠的對照組），對比marker的表達情況做出是否激活的判斷。如果想要得到更加迅速、高效的激活響應，可以適當增加磁珠用量，或者在24h-48h之間吹打混勻孔內的細胞和磁珠，幫助細胞和磁珠再次充分接觸，但是具體實驗效果需要根據實驗目的進行調整，并不是激活響應越快、越高就越好。
加入激活磁珠后，鏡下觀察發現磁珠和細胞沒有結合，是什么原因？
剛加入磁珠和細胞下落后，結合沒有那么快，可以等24h再觀察
CD3/CD28激活磁珠，在傳代T細胞的時候需要去除嗎?還是可以直接傳代?
磁珠去不去除都可以。如果需要去除磁珠，可以在細胞激活后開始聚團擴增的時候去除，一般是在激活后48-72小時，鏡下可以看到聚團擴增的T細胞時，通過移液槍輕柔吹打的方式吹散細胞，磁吸去除磁珠。磁珠去除后，在IL-2（或其他常規可以使用的細胞因子）作用下，正常可以擴增7-14天。
哪款磁珠可以用于細胞激活？
如果用于T細胞激活，推薦5μm SA（Cat. No. 22306）和5μm （Cat. No. 70105）羧基磁珠。
暫無視頻
暫無應用案例
